Генетична диагностика

Скрининг · Предиктивни маркери · Фармакогенетика · Имунотерапия

KRAS, NRAS, BRAF – Високочувствителна PCR детекция

Ултрачувствителен алел-специфичен qPCR тест за бърза детекция, идентификация и количествено определяне на клинично значими мутации в KRAS (екзони 2, 3, 4), NRAS и BRAF V600E при метастатичен колоректален карцином. Използва CE-IVD, IVDR-съобразен тест, използващ интеркалираща технология за изключително специфична детекция на ниско-честотни варианти в FFPE туморен материал.

• Материал: FFPE туморна тъкан — парафинов блок или 5–10 среза на предметно стъкло/навити в микроепруветка
• Минимално туморно съдържание: ≥10% туморни клетки в пробата
• Срок за резултат: 14 работни дни
• Придружаващи документи: епикриза, хистологичен препарат или патологоанатомичен протокол с верификация на диагнозата, подписано, информирано съгласие

Резултатът се предоставя с клинична интерпретация и препоръка за терапевтично поведение съгласно актуалните международни препоръки.

Приложение

KRAS/NRAS див-тип статус е задължително условие за приложение на анти-EGFR терапия (Цетуксимаб, Панитумумаб) при метастатичен колоректален карцином. BRAF V600E мутация индицира комбинирана терапия с Енкорафениб + Цетуксимаб. Прецизната детекция на RAS/RAF статус е ключова за избор на оптимална първа линия терапия и избягване на неефективно лечение.

Задължителен предиктивен тест преди започване на анти-EGFR биологична терапия при метастатичен колоректален карцином; стратификация на пациенти за таргетна или BRAF-инхибиторна терапия; мониторинг на придобита резистентност.

Микросателитна нестабилност (MSI) – Биомаркер за имунотерапия и наследствен риск

Микросателитната нестабилност е геномна характеристика, отразяваща дефект в системата за поправка на ДНК грешки (dMMR). MSI-High статусът е ключов предиктивен биомаркер за отговор към имунотерапия с PD-1/PD-L1 инхибитори и индикатор за Lynch синдром — най-честото наследствено онкологично заболяване.

Анализирани маркери

Тестът използва разширен панел от 13 микросателитни маркера като се използва паралелен сравнителен анализ на туморна FFPE тъкан срещу нормална тъкан/кръв на същия пациент. По този начин се елиминират герминативни полиморфизми и се осигурява прецизна детекция на соматична нестабилност.

Клинични индикации

• Колоректален карцином — задължителен биомаркер преди имунотерапия
• Ендометриален карцином — стандарт на грижа по ESMO 2023
• Стомашен, панкреатичен и овариален карцином — при клинично показание
• Скрининг за Lynch синдром — насочване към генетично консултиране

Свързани медикаменти

Имунотерапия: Pembrolizumab, Nivolumab — одобрени при MSI-High/dMMR, солидни тумори независимо от локализацията (FDA/EMA)

Метод

Златен стандарт: PCR-базиран, сравнителен, фрагментен анализ на микросателитни маркери (тумор/нормална тъкан)

Материал и срок

• Материал: FFPE туморна тъкан — парафинов блок или 5–10 среза на предметно стъкло
• Задължително: Успоредна проба от незасегната тъкан на същия пациент — парафинов блок или срез от резекционни линии или периферна кръв (EDTA)
• Минимално туморно съдържание: ≥30% туморни клетки в пробата
• Срок за резултат: 14 работни дни
• Придружаващи документи: епикриза, хистологичен препарат или патологоанатомичен протокол с верификация на диагнозата, подписано информирано съгласие

Резултатът се предоставя с клинична интерпретация, класификация на MSI статуса (MSI-High / MSI-Low / MSS) и препоръка за терапевтично поведение и/или генетично консултиране.

DPYD фармакогенетика – Предотвратяване на токсичност от химиотерапия с флуоропиримидини

Флуоропиримидините (5-флуороурацил/5-FU и капецитабин/Xeloda®) са основни химиотерапевтични агенти при колоректален, стомашен, панкреатичен рак, рак на гърдата и глава-шия. Въпреки ефективността, флуоропиримидините причиняват тежка токсичност (миелосупресия, мукозит, диария, невротоксичност) при 10-30% от пациентите, с летален изход при 0.5-1%.

DPYD дефицит

DPYD (dihydropyrimidine dehydrogenase) метаболизира >80% от флуоропиримидините. Генетични варианти в DPYD гена водят до редуцирана ензимна активност, натрупване на активен 5-FU и драматично повишен риск от животозастрашаваща токсичност. Частичен дефицит (хетерозиготи) – среща се при 3-8% от европейската популация; пълен дефицит при ~0.1-0.5%.

Анализирани варианти

Тестът генотипира всички клинично значими DPYD варианти според международни guidelines (CPIC, EMA, FDA):

• DPYD*2A (c.1905+1G>A) — най-чест, пълна загуба на функция
• DPYD*13 (c.1679T>G) — значителна редукция на активност
• 2846A>T (D949V) — частична редукция
• HapB3 (c.1236G>A) — 25-30% редукция

 Материал и срок

• Материал: Периферна кръв — EDTA епруветка (3–5 ml); подписано информирано съгласие
• Вземане: Стандартна венепункция, без специална подготовка
• Срок за резултат: 14 работни дни
• Кога да се изследва: Преди началото на флуоропиримидинова химиотерапия — резултатът е необходим за определяне на началната доза

Резултатът се предоставя с клинична интерпретация и конкретна препоръка за дозиране съгласно препоръките на Европейската ангенция по лекарствата (ЕМА) и CPIC.

Клинично приложение: DPYD генотипирането е силно препоръчително (EMA) или задължително (някои национални гайдлайни) преди започване на флуоропиримидинова терапия. Позволява идентификация на рискови пациенти, персонализиране на дозата и предотвратяване на потенциално фатална токсичност. Особено важно при адювантни режими, където токсичността може да компрометира завършването на лечението.

Неинвазивен скрининг без колоноскопия

ColoTect™  – Мулти-таргетен фекален ДНК тест

ColoTect™  е неинвазивен скрининг тест за колоректален карцином с доказано превъзходство над стандартния фекален имунохимичен тест (FIT). Комбинира детекция на два ДНК метилационни маркера в изпражнения чрез количествена метилационно-специфична PCR (qMSP) с имунохимичен тест за окултно кървене — в една проба, без подготовка, без дискомфорт.

 Клинична валидация

• Чувствителност за колоректален карцином: 1% (vs. 85.8% за FIT)
• Чувствителност за напреднали предракови лезии: 5% (vs. 22.5% за FIT)
• Специфичност: 4% при висока детекция на ранни стадии

Предимства пред FIT

ColoTect™ открива значително повече ранни карциноми и предракови лезии от стандартния имунохимичен тест. Молекулярните метилационни маркери са независими от активно кървене — тестът работи и при лезии, които не кървят видимо, което е основното ограничение на FIT.

За кого е подходящ

• Лица над 45 години без симптоми — рутинен скрининг
• Пациенти с фамилна анамнеза за колоректален карцином
• Лица, отказващи или неподходящи за колоноскопия
• Проследяване след полипектомия или резекция

 Как се взима пробата

Домашно вземане на фекална проба. Без диетични ограничения. Без подготовка. Пробата се изпраща или донася в лабораторията в специализиран контейнер.